Detection of CDT toxin genes in Campylobacter spp. strains isolated from broiler carcasses and vegetables in São Paulo, Brazil

Campylobacteriosis is a worldwide distributed zoonosis. One of the main virulence factors related to Campylobacter spp. in animals and humans is the cytolethal distending toxin (CDT), encoded by three adjacent genes (cdtA, cdtB, cdtC). The occurrence of Campylobacter spp. in samples of vegetables has not been reported in Brazil yet, and has seldom been described in the international literature. The detection of CDT in these strains has not been reported, either. The objectives of the present study were to determine the occurrence of Campylobacter spp. strains carrying virulence factors in samples of poultry and vegetables (lettuce and spinach) from different points of sale, thus verifying if vegetables are as an important vehicle for potentially virulent Campylobacter spp. strains as poultry. Twenty four strains were identified as Campylobacter jejuni by phenotypic and genotypic methods: 22 from broiler carcasses and two from lettuce samples. Three strains were identified as Campylobacter coli: two from broiler carcasses and one from lettuce. The presence of the cdt genes were detected in 20/24 (83.3%) C. jejuni strains, and 3/3 (100%) C. coli strains. The isolation of Campylobacter spp. strains with the cdt gene cluster in lettuce samples points to a new possible source of contamination, which could have an impact in the vegetable production chain and risk to public health. Results show that potentially virulent C. jejuni and C. coli strains remain viable in samples of broiler carcasses and vegetables at the points of sale.

Brucella canis infection in dogs attended in veterinary clinics from patos, Paraíba state, Brazil

To determine the frequency of anti-Brucella canis antibodies in dogs attended in veterinary clinics from Patos, Paraíba State, Brazil, as well as to identify risk factors and to isolate and identify the agent, 193 dogs were used. Agar gel immunodiffusion test (AGID) was used to detect B. canis antibodies in sera. Isolation of B. canis was carried out in blood and bone marrow from seropositive animals. Six animals tested seropositive in AGID, resulting in a frequency of 3.11 percent. B. canis was isolated from bone marrow of one seropositive animal, with confirmation by PCR. Lack of cleaning of the dog's environment was identified as risk factor (odds ratio = 7.91). This is the first report of isolation of B. canis in dogs from the Northeast region of Brazil.

Estabelecimento da leptospirose por infecção experimental em hamsters (Mesocricetus auratus) com leptospira interrogans sorovar canicola, estirpe LO4, por exposição cutânea integra e com abrasões / Development of the leptospirosis by experimental infection in hamsters (Mesocricetus auratus) with leptospira interrogans serovar canicola, strain LO4, by intact and scratched skin exposures

O estabelecimento e a evolução da leptospirose em hamster (Mesocricetus auratus) pela infecção experimental com Leptospira interrogans sorovar Canicola, estirpe LO4, pela exposição cutânea íntegra e escarificada, tendo como controle a via intraperitoneal foram avaliados. Foram utilizados 120 hamsters, fêmeas, distribuídas em dois grupos de acordo com a via de inoculação (pele escarificada e pele íntegra). O inóculo infeccioso foi constituído por uma cultura pura de L. interrogans sorovar Canicola (estirpe LO4), isolada do fígado de um suíno de abatedouro em Londrina, Estado do Paraná e tipificada pela técnica de adsorção de aglutininas com o kit de anticorpos monoclonais no Royal Tropical Institute, Amsterdã, Holanda. Os animais foram observados duas vezes ao dia, durante 21 dias. Os animais que vieram a óbito foram necropsiados e colhidos assepticamente rins, fígado, sistema genital (útero e ovário) e cérebro. Os animais sobreviventes foram eutanasiados após 21 dias. Foram ainda colhidas amostras de soro sanguíneo por punção cardíaca para a pesquisa de aglutininas antileptospiras nos animais sobreviventes, pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM). Para a detecção de leptospiras, foram utilizados microscopia direta a fresco e cultivo microbiológico. A via cutânea escarificada induziu maior letalidade quando comparada com a pele integra, com estabelecimento e evolução da leptospirose. Por outro lado, a via cutânea íntegra induziu mais frequentemente o estado de portador renal e/ou genital para leptospirose. A estirpe LO4 apresentou baixo poder imunogênico, induzindo soroconversão na SAM em apenas um animal.

The establishment and evolution of leptospirosis in hamster (Mesocricetus auratus) by experimental infection with Leptospira interrogans serovar Canicola, LO4 strain, by intact and scratched skin exposures, having as control the intraperitoneal route, were evaluated. Hundred-twenty female hamsters distributed in two groups according to inoculation route (intact and scratched skin) were used. Infectious inoculum was constituted by a pure culture of L. interrogans serovar Canicola (strain LO4), isolated from liver from a slaughtered swine in Londrina, Paraná state and typified by agglutinins adsortion technique with monoclonal antibody kit at the Royal Tropical Institute, Amsterdam, the Netherlands. The animals were observed twice a day during 21 days. Animals that died were necropsied and kidneys, liver, genital tract (uterus and ovaries) and brain were aseptically collected. On the 21st post-inoculation day, surviving animals were euthanized. In these animals, serum samples were also collected by cardiac puncture to antileptospires agglutinins research using microscopic agglutination test (MAT). Fresh direct microscopy and microbiological culture were used for the detection of leptospires. Scratched skin route induced larger lethality when compared to intact skin route, with establishment and evolution of leptospirosis. On the other hand, intact skin route induced renal and/or genital carrier state more frequently. LO4 strain presented low immunogenic power, characterized by soroconversion at the MAT in only one inoculated animal.

Interference of vaccinal antibodies on serological diagnosis of leptospirosis in vaccinated buffalo using two types of commercial vaccines

The vaccinal antibodies interference represents one of the Microscopic Agglutination test - MAT limitation in the animal leptospirosis serum diagnosis. Prospective studies showing the dimensions of this effect are rare in buffaloes. This study aimed to determine the anti-Leptospira serum agglutinin profile in vaccinated female buffaloes using two types of commercial vaccines against leptospirosis: bacterin (whole bacterial cell) and purified outer membrane and to evaluate the vaccinal interference on serum diagnosis. Three groups of 11 adult buffalo females were established: G1-control, non-vaccinated, G2- vaccinated with bacterin vaccine with six serovars, G3- outer membrane purified vaccine with five serovars. A booster dose was administrated 30 days after the first vaccination (dpv) and two re-vaccinations six months a part (210 and 390 dpv). Serum samples were collected on days 0, 15, 40, 45, 60 and every 30 days until 540 dpv. G1, G2 and G3 serum samples were submitted to MAT with the serovars present in the vaccines. G1 remained always negative. Both vaccines induced serologic responses in MAT at 150 dpv against all serovars and they revealed maximum titers around 45 and 60dpv as follows: Pomona: G2 (1600) and G3 (3200); Hardjo: G2 and G3 (1600); Wolffi: G2 (800) and G3 (1600); Icterohaemorrhagiae: G2 and G3 (800); Grippotyphosa: G2 and G3 (200) and Canicola: G2 (NR) and G3 (400). Even though, the Wolffi serovar is not present in the purified outer membrane vaccine, G3 showed a response to that serovar, probably due to cross reaction to the serovar Hardjo. The G3 titers were higher and appeared earlier than in G2, but with similar serologic profiles. At the re-vaccination there was an increase on agglutinin levels, but of less intensity than those previously observed. After six months from the second revaccination (540 dfv), G2 and G3 were almost negative, which demonstrated the short diagnostic interference.

A persistência de anticorpos vacinais representa um dos entraves para o sorodiagnóstico da leptospirose. Raros estudos dimensionam prospectivamente esse efeito na espécie bubalina. O presente trabalho objetivou traçar o perfil de aglutininas séricas anti-Leptospira spp.em búfalas vacinadas contra leptospirose com dois tipos de vacina comercial : bacterina e de membrana externa purificada e avaliar a interferência temporal dos títulos vacinais no sorodiagnóstico. Três grupos de 11 fêmeas bubalinas adultas: G1- controle não vacinado, G2 -vacinado com bacterina contendo seis sorovares e G3- recebeu vacina com membrana externa purificada de cinco sorovares, receberam reforço 30 dias pós primo vacinação (dpv) e duas revacinações semestrais nos dias 210 e 390. Foram colhidas amostras sorológicas nos dias 0, 15, 30, 45, 60 e a cada 30 dias até 540 dpv e analisadas pela reação de Soroaglutinação Microscópica-SAM frente aos sorovares presentes nas vacinas. G1 manteve-se sempre negativo. Ambas vacinas induziram resposta sorológica na SAM aos 15° dpv para todos os sorovares e revelaram títulos máximos ao redor do 45° e 60° dpv.: Pomona: G2 (1600) e G3 (3200); Hardjo: G2 e G3 (1600); Wolffi: G2 (800) e G3 (1600), Icterohaemorrhagiae: G2 e G3 (800), Grippotyphosa: G2 e G3 (200) e Canicola: G2 (NR) e G3 (400). Apesar da vacina de membrana externa não possuir o sorovar Wolffi, G3 revelou resposta para este sorovar, provavelmente pelo sorovar Hardjo vacinal. Os perfis sorológicos representados graficamente pela média geométrica dos títulos de aglutininas foram semelhantes, porém em G3 mais precoces e mais elevados que G2. Na revacinação houve aumento do nível de aglutininas, porém de menor intensidade que o anterior; e ao final de seis meses da segunda revacinação (540 dpv) eram quase nulos, demonstrando curta duração da interferência ao diagnóstico.

Molecular subtyping of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains isolated from different animal species in the state of São Paulo, Brazil

O objetivo do presente trabalho foi caracterizar geneticamente estirpes de Campylobacter jejuni subsp. jejuni isoladas de humanos e de diferentes origens animais (bovinas, suínas, cães, primatas, javalis, suínos e aves de corte). Um total de 828 amostras (fezes, carcaças, fetos abortados e útero histerectomizado) foram analisadas por métodos de rotina bacteriológica e 36 estirpes de C. jejuni foram isoladas. Trinta estirpes de origem fecal humana foram obtidas de laboratórios de análises clínicas da cidade de São Paulo. As 66 estirpes de C. jejuni isoladas foram submetidas à caracterização genética. Oligonucleotídeos baseados no gene fla A foram usados na reação de polimerase em cadeia (PCR) e amplificou um fragmento de 702 pb. Os produtos obtidos pela PCR foram avaliados pelas técnicas de seqüenciamento e análise genealógica. Análise da variabilidade genética das 66 estirpes revelou 44 diferentes subtipos de C. jejuni. Um subtipo de origem humana apresentou seqüência idêntica à de C. jejuni depositada no GenBank (GENBANK acesso número AF050186). A subtipagem das estirpes de C. jejuni baseadas no seqüenciamento da região variável do gene fla A e na análise do alinhamento das seqüências pelo método da Máxima Parcimônia, mostraram-se altamente discriminatórios fornecendo melhores condições para a correta diferenciação entre estirpes originárias de surto e as isoladas esporadicamente. Este foi o primeiro estudo de subtipagem molecular de estirpes de C. jejuni de origem humana e animal utilizando a técnica do seqüenciamento com análise genealógica realizado no Estado de São Paulo, Brasil.

Detection of Leptospira spp. in the semen and urine of bulls serologically reactive to Leptospira interrogans serovar hardjo

O presente trabalho avaliou a PCR na detecção de leptospiras em sêmen e urina de dez touros sorologicamente reagentes, comparando seus resultados com aqueles obtidos por outras técnicas de diagnóstico. Foram realizadas duas colheitas de materiais em dias alternados. As amostras de sêmen e de urina foram separadas em alíquotas para visualização direta em microscopia de campo escuro, inoculação em hamsters (apenas para o sêmen), isolamento em meio de cultura e PCR. Nenhum hamster apresentou positividade na prova de soroaglutinação microscópica (SAM); fragmentos de rins e fígado desses animais foram utilizados para a tentativa de isolamento em meio de cultura, sendo positivo o cultivo a partir do rim de hamster inoculado com semen de um touro, e do fígado de hamsters inoculados com o semen de três touros. O isolamento em meio de cultura foi negativo para todas as amostras de sêmen, mas foi positivo para cinco amostras de urina. Na PCR não houve resultado positivo para as amostras de sêmen, e apenas uma amostra de urina apresentou resultado positivo, sendo coincidente com uma das culturas positivas. Não foi possível visualizar leptospiras em nenhuma das amostras por exame direto em microscopia de campo escuro.

Comparison of electrophoretic protein profiles of campylobacter jejuni subsp. jejuni isolated from different animal species

Electrophoretic protein profiles of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains isolated from feces of seven animal species, including man, were compared. Fourteen strains (two from each species) plus two human strains and the reference one, were ruptured by ultrasound and their total soluble proteins were analyzed by SDS-PAGE technique in a 12(per cent) polyacrylamide gel with computerized densitometric reading by the molecular analyst software. All the strains had bands in common that correspond to 45 and 66 Kda molecular weight. The disagreement corresponded to a 97 to 200 Kda molecular weight region. From the 17 strains, 13 (76.5 per cent), were classified as biotype I, three (17.6 per cent) as biotype II and one (5.8 per cent) as biotype III. Since protein extracts were obtained from cells grown under identical conditions, and thus, able to express the same phenotype, this disagreement region could be related to different genotypes or serotypes.

Evaluation of the counterimmunoelectrophoresis reaction as a serodiagnosis test for swine leptospirosis

Avaliou-se a reação de contraimunoeletroforese (CIE) como teste gênero-específico para diagnóstico da leptospirose suína, usando-se três extratos solúveis de Leptospira sp, sorovares pomona, icterohaemorrhagiae e patoc, obtidos pelo tratamento com Triton X-100 a quente e aplicados a amostras de soro de suínos subdivididos em três grupos: Grupo 1, 10 suínos experimentalmente infectados com estirpe Pomona; Grupo 2, 50 suínos naturalmente infectados e Grupo 3, controle. As amostras de soros foram submetidas à reação de CIE e os resultados comparados aos da Soroaglutinação Microscópica (SAM), técnica de referência pela WHO. Os Grupos 1 e 3 foram monitorados por 93 dias após a inoculação (p.i.). Pela SAM a soroconversão do Grupo 1 ocorreu por volta do 10º dia p.i., enquanto pela CIE, empregando-se qualquer extrato antigênico, foi anterior à SAM. Quando a CIE foi realizada frente a antigeno homólogo à infecção, seus resultados foram equivalentes aos da SAM, não se verificando o mesmo frente aos antígenos heterólogos. Neste aspecto, os Grupos 1 e 3 mostraram comportamento diferente pois não houve diferença significativa entre os resultados da CIE frente aos três antígenos, o que poderia significar serem independentes do sorovar responsável pelo surto ou infectante. Embora a CIE seja segura, rápida, de fácil execução, de baixo custo e ideal para análise em grande escala de amostras, revelou-se de limitada capacidade gênero-específica, o que não é desejavel para testes de triagem de campo; mas poderia ser útil na detecção precoce de resposta sorológica em relação à SAM.

Avaliaçäo da eficiência de estirpes de Leptospira biflexa no diagnóstico sorológico de triagem da leptospirose animal / Efficiency evaluation of leptospira biflexa strains on screening serological diagnosis of the animal leptospirosis

Avaliou-se a eficiência de estirpes de Leptospira biflexa, como antígenos na técnica de soroaglutinaçäo microscópica (SAM), para diagnóstico de triagem da leptospirose animal. Foi selecionado um total de 559 soros das espécies bovina, suína, bubalina, equina e canina; de animais provenientes na sua maioria de rebanhos problemas e/ou de casos suspeitos da doença. Esses soros foram inicialmente submetidos a SAM com 20 sorotipos de Leptospira interrogans e posteriormente com as estirpes Buenos Aires, Patoc-1, Rufino e Säo Paulo. Foram determinados os índices de sensibilidade, especificidade, concordância, valores preditivos do positivo e do negativo e resultados falsos. As estirpes aquicolas estudadas näo se mostraram eficientes para serem recomendadas como antígeno único ou em conjunto, para diagnóstico de triagem da leptospirose animal

Infertilidade e abortamentos em rebanho bovino causados por campylobacter fetus subsp.fetus: profilaxia e tratamento / Infertility and abortions in cattle due to campylobacter fetus subsp.fetus: control procedures and treatment

Campylobacter fetus subs.fetus foi isolado do conteúdo estomacal de um feto abortado, de lavado e "swabs" prepuciais de um touro provenientes de um rebanho que apresentava elevados índices de infertilidade, repetiçöes de cio, várias coberturas para fertilizaçäo e casos de abortamento.Instituiu-se antibioticoterapia tópica e sistêmica, recomendando-se repouso sexual do macho e das fêmeas por 30 dias.Após esse período foram feitos examesbacteriológicos de controle que se mostraram negativos, näo havendo ocorrência de novos abortamentos.Os autores discutem o papel do Campylobacter fetus subsp.fetus nafertilidade de bovinos

Metrite purulenta em égua puro-sangue inglês por Candida rugosa / Purulent metritis in a throughbred mare caused by Candida rugosa

Uma égua puro-sangue inglês, que havia dado cria em parto normal, foi coberta novamente no primeiro cio, sendo diagnosticada a phenchez mediante palpaçäo retal. Decorridos alguns meses e näo havendo evoluçäo da gestaçäo, foi realizada nova palpaçäo retal, que proporcionou a saída de grande quantidade de pus pela vagina. Foi isolada a levedura Candida rugosa, sendo a primeira citaçäo desta espécie causando metrite purulenta em éguas, no Brasil